华辰生物 3D StarPore® 微载体 十大特征

• 3D StarPore 微载体是华辰生物（Huachen Bio)专门为培养体积从几毫升到几百升不等的各种动物细胞(间充质干细胞、293细胞、Vero细胞等）的高产量悬浮培养而开发的自主研发产品。具有优良的表面性质和光学性质，比重略大于水。
• 明胶成分的柔性多孔结构，使得细胞可以在微载体中生长，能与多种细胞自然配位结合，细胞贴壁，生长和收获都容易。
• 微载体是连续大孔结构，保护了细胞不受剪切力的损伤，允许细胞创建一个微环境，优化的表面特征适合于细胞的有效黏附和伸展。
• 粒径大小在250-350μm之间，形态圆润，更适合贴壁细胞黏附扩增。
• 可以进行温和消化，可以完全溶解于消化液中，30分钟内即可完成消化，方便细胞终制剂的收获。
• 所有原料都来源于药用辅料，按照GMP级别进行生产。
• 优化的大小、密度和大孔性以促进均一悬浮，并使各种细胞优良地生长和高产。
• 减少对培养基的需求：对培养基需求的减少意味着细胞培养成本的大大节省 。
• 减少劳动力需求：由于可以在小体积中培养大量的细胞，微载体培养需要更小的培养容器，从培养液中分离细胞是很简单的: 停止搅拌，粘附有细胞的微载体在重力作用下沉降下来，上清就可以取出。
• 降低污染的风险：封闭式连续化的微载体培养减少了处理步骤的数量，大大降低了污染的风险。

干细胞大规模培养工艺流程

一、实验准备（实验设备）

2. 实验试剂

3. 实验耗材

二、实验工艺流程

三、实验日程安排

四、反应器关键工艺参数

五、10L反应器3D微载体细胞培养参数

六、细胞收获参数

七、试验过程和结果

D-1天

将1L的MSC完全培养基，转入12g微载体瓶内， 用力摇匀、充分混匀，微载体分散性良好。 静置5分钟后，绝大部分沉底，水合后空微载体体积约为220ml。泵入反应器，执行下一步操作。

七、试验过程和结果

3D StarPore微载体培养间充质细胞显微镜明场照片  

3D StarPore微载体培养间充质细胞荧光显微镜照片   

细胞计数仪结果图

细胞扩增倍数和细胞扩增数量

细胞培养过程 葡萄糖和乳酸代谢情况 及细胞直径数据

D4 微载体裂解收获

八、质量检测

生化法检测 D4细胞微载体裂解， PBS第一次和第二次清洗后， 上清微载体残留， 第二次清洗后残留满足要求。 两次离心即可达到微载体残留 低于检测线。

ELISA检测 D4细胞PBS第一/二次清洗后， 终冻存制剂上清 裂解液胶原酶残留， 第二次清洗后，制剂残留， 均满足要求。

细胞培养基上清内毒素检测

D4细胞培养培养基上清，经定量动态显色法检测后，内毒素结果＜0.15EU/ml

九、结果与结论

1.试验结果

（1）细胞培养：2D平面十层细胞工厂扩增正常，活率97.82%，数量满足细胞接种反应器需求。

（2）细胞收获：3D 10L反应器培养3天，细胞数量99.83亿，扩增16.64倍，细胞活率98.16%；培养4天，取样计数，细胞总量150.2亿；经PBS洗涤后，加入裂解液消化微载体后，收获细胞121.8亿，扩增20.3倍，活率97.64%，细胞直径14.88μm，符合细胞培养收获标准。

（3）细胞质控：d4 反应器收获细胞，进行洗涤、冻存，第二次清洗和冻存制剂，微载体和裂解液残留检测全部合格。

（4）细胞质控：细胞d4培养基上清内毒素小于0.25EU/ml，显示总反应体系的超低内毒素标准。

2.试验结论

（1）细胞培养：细胞扩增倍数（d4＞20倍）、细胞数量和活率，符合要求。

（2）细胞收获：细胞活率（＞95%）符合标准要求。

（3）细胞质控：内毒素和残留检测等指标符合要求。

3D StarPore® Max 转瓶系统

• 500ml转瓶，一台starspan™ mini反应器；
• 4个瓶位，一次最多2L体系；
• 1个500ml转瓶，可以培养400ml体系，接种2g/L，0.8g，接种4E7细胞，扩增20倍，即单个瓶4天可以收获8亿细胞，等同于一个十层细胞工厂，一个mini反应器一次可以收获32亿细胞，等同于四个十层细胞工厂；
• 降低培养箱占用率、降低人工、降低细胞处理工作量。

3D StarPore® Max 干细胞药品大规模生产  华辰两级罐方案

二级罐400亿干细胞扩增方案

• 5L反应罐，1g/L，培养体积2L，接种1E8/2g， D4扩增20倍，收获2E9细胞
• 50L二级反应罐，1g/L，培养体积40L，接种2E9细胞 D4扩增20倍，收获4E10细胞量。

二级罐1600亿干细胞扩增方案

• 10L反应罐，1g/L，反应体积8L，接种4E8/8g D4扩增20倍，收获8E9细胞
• 200L二级反应罐，1g/L，反应体积160L，接种8E9细胞，D4扩增20倍，收获1.6E11细胞量