400-965-9800
一、化学成分限定培养基3D StarPore Max微载体间充质干细胞培养扩增
培养基：华辰生物间充质干细胞化学成分限定培养基
微载体：3D StarPore Max微载体
种子细胞：无血清培养基培养的P3代冻存干细胞，复苏后直接接种微载体（含DMSO）
细胞接种密度：1.8E7细胞接种到200mg微载体中，
培养瓶：250ml 培养瓶，接种体积100ml，培养体积200ml。
补液与换液：d0天接种100ml，d1天补液到200ml，d3天换液100ml，自d4天起每天换液150ml。持续换液，收获培养基上清，持续到d9天全量培养基收获。
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时间/ 数据平均值 |
细胞总量 |
活率 |
直径 |
扩增倍数 |
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D0 |
18.0 E6 |
98.19% |
15.34μm |
1倍 |
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D3 |
132.66E6 |
99.20% |
16.94μm |
7.37倍 |
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D4 |
225E6 |
98.93% |
16.85μm |
12.5倍 |
二、每日外泌体颗粒数-NTA测试数据
华辰生物化学成分限定培养基（500ml基础培养基+3ml添加物）本底颗粒数浓度为1.39E8/ml
二、200ml转瓶微载体培养系统每日外泌体颗粒数-NTA测试数据
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培养时间 |
粒子浓度/ml |
平均粒径/nm |
当日收获体积V/ml |
当日总颗粒数/nm |
|
D3 |
2.36 E9 |
114.5 |
100 |
2.36 E11 |
|
D4 |
2.18 E9 |
115.8 |
150 |
3.27 E11 |
|
D5 |
2.28 E9 |
149.2 |
150 |
3.42 E11 |
|
D6 |
2.69 E9 |
151.6 |
150 |
4.03 E11 |
|
D7 |
1.87 E9 |
141.9 |
150 |
2.8 E11 |
|
D8 |
1.99 E9 |
147.5 |
150 |
2.98 E11 |
|
D9 |
1.83 E9 |
137.4 |
200 |
3.66 E11 |
|
累计 |
/ |
/ |
1050 ml |
2.25 E12 |
二、10L反应器可收获外泌体颗粒数
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培养时间 |
粒子浓度/ml |
平均粒径/nm |
当日收获体积/L |
当日总颗粒数/nm |
|
D3 |
2.36 E9 |
114.5 |
5L |
11.8 E12 |
|
D4 |
2.18 E9 |
115.8 |
7.5L |
16.35 E12 |
|
D5 |
2.28 E9 |
149.2 |
7.5L |
17.1 E12 |
|
D6 |
2.69 E9 |
151.6 |
7.5L |
20.18 E12 |
|
D7 |
1.87 E9 |
141.9 |
7.5L |
14.03 E12 |
|
D8 |
1.99 E9 |
147.5 |
7.5L |
14.9 E12 |
|
D9 |
1.83 E9 |
137.4 |
10L |
18.3 E12 |
|
累计 |
/ |
/ |
52.5L |
1.12 E14 |
10L反应器，每次可收获培养上清7.5L，则收获的外泌体总量为：1.12E14
三、试验过程 荧光图
Calcein AM染色，绿色荧光亮点代表活细胞
三、试验过程 荧光图
Calcein AM染色，绿色荧光亮点代表活细胞
四、试验过程 细胞代谢
细胞培养过程 葡萄糖和乳酸代谢情况
五、培养到day9 脐带间充质干细胞标志物流式鉴定
结果显示，分泌外泌体的干细胞流式结果符合干细胞质量标准要求。
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